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MST助力分子間相互作用分析

2024-09-01 點擊數(shù)：0 分享至:

在生命科學(xué)領(lǐng)域中，生物分子間的相互作用具有非常重要的作用。通過對分子間相互作用分析，不僅可闡明細(xì)胞生物學(xué)事件，而且為疾病發(fā)生機制和藥物發(fā)現(xiàn)提供基礎(chǔ)。微量熱泳動（microscale thermophoresis,MST）是一種分析生物分子相互作用的技術(shù)。

MST技術(shù)是一種基于檢測在溫度梯度中的生物分子電泳遷移率的變化而檢測生物分子間結(jié)合、解離過程，獲取分子間相互作用的模式和動力學(xué)常數(shù)等方面信息的新技術(shù)，是近年來發(fā)展的研究生物分子相互作用的強有力工具，已廣泛應(yīng)用于藥物篩選、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、分子檢測和醫(yī)學(xué)診斷等生命科學(xué)領(lǐng)域。

MST原理

MST是一種表征生物分子特性的光學(xué)方法，是粒子在微觀溫度梯度中的定向運動。將其中一個互作分子(大多是蛋白)標(biāo)記熒光染料或者融合GFP標(biāo)簽，將標(biāo)記蛋白和配體分子按照特定的濃度梯度置于毛細(xì)管中，紅外激光加熱產(chǎn)生一個微觀的溫度梯度場發(fā)生熱泳動，其水化層、分子大小、電荷等分子性質(zhì)會隨著熱泳動發(fā)生改變，進而引起反應(yīng)體系中熒光分布的變化。

圖片

MST特點

①檢測下限低，弱分子力首選；
②需固定樣品，且樣品用量較小，ug級別就能開展檢測；
③無需使用抗體，無需獲得高純度蛋白，直接使用Tris-NTA dye標(biāo)記His-Tag融合蛋白，即可上機進行檢測；
④能夠測量復(fù)雜生物溶液（細(xì)胞裂解物、血清、洗滌劑、脂質(zhì)體等）；
⑤相互作用物尺寸范圍廣；
⑥不僅能定性兩個生物分子的互作關(guān)系，還可以定量判斷結(jié)合的親和力強弱。

MST應(yīng)用范圍

1、蛋白-小分子相互作用分析（蛋白酶與抑制劑、細(xì)胞膜蛋白活性）
2、蛋白-蛋白相互作用分析（包括抗原-抗體、分子伴侶-底物）
3、蛋白-肽相互作用分析
4、肽-肽相互作用分析
5、蛋白-核酸相互作用分析
6、核酸-核酸相互作用分析
7、核酸適配子-小分子相互作用分析

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