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抗體專(zhuān)題資料

抗體亞型鑒定

亞型指的是相同的構(gòu)成方式，但是空間結(jié)構(gòu)不同的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。抗體亞型，指的是在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的“Y”構(gòu)型的免      疫球蛋白（Ig），基于小分子多肽結(jié)構(gòu)上的差異，可以進(jìn)一步的進(jìn)行細(xì)分。

抗體亞型

重鏈
抗體以一個(gè)或者多個(gè)“Y”字形單體存在,每個(gè)“Y”字形單體由 4 條多肽鏈組成,包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。 通常，抗體的種類(lèi)由重鏈決定。例如哺乳動(dòng)物 Ig 的重鏈一共有五種,分別用希臘字母α、δ、ε、γ和 μ 來(lái)命名,相對(duì)應(yīng)組成的抗體就稱(chēng)為 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。其中，人的γ可以進(jìn)一步細(xì)分為γ1、γ2、γ3、γ4 等亞類(lèi)，分別對(duì)應(yīng) IgG1, IgG2, IgG3 和 IgG4 四個(gè)亞型，小鼠γ可以進(jìn)一步細(xì)分為γ1、γ2a、γ2b、γ3 等亞類(lèi)，分別對(duì)應(yīng) IgG1, IgG2a, IgG2b 和 IgG3 四個(gè)亞型。
 

輕鏈
哺乳動(dòng)物有兩種輕鏈：λ型和κ型。出于科研的需要，人們也會(huì)對(duì)輕鏈的亞型進(jìn)行鑒定。

類(lèi)/亞類(lèi)

重鏈

輕鏈

分子量（kDa）

結(jié)構(gòu)

功能

IgA1
IgA2

 

α1α2

 

λ或κ

150-600

單體-四聚體

 

IgA 有血清型和分泌型，血清型 IgA 不顯示重要的免疫功能，分泌型 IgA 存在于分泌液中，如唾液、淚液、初乳、鼻和支氣管分泌液等，是機(jī)體粘膜局部抗感染免疫的主要抗體。

功能不詳；

IgD

δ

λ或κ

150

單體

與 IgM 共同存在于 B 細(xì)胞發(fā)育的各個(gè)階段；大部分與 B 細(xì)胞結(jié)合。

IgE

ε

λ或κ

190

單體

結(jié)合變應(yīng)原引發(fā)巨細(xì)胞釋放組胺，可以對(duì)抗寄生蟲(chóng)感染。

IgG1 IgG2 IgG3 IgG4

γ1

γ2

λ

γ3

γ4

λ或κ

150

單體

血清中最主要的免疫球蛋白。在免疫反應(yīng)中最主要的抵 御病原的侵襲的抗體為 IgG;

可通過(guò)胎盤(pán)。

IgM

μ

λ或κ

900

五聚體

最早產(chǎn)生的反應(yīng)性抗體，在 B 細(xì)胞表面表達(dá)，分泌型有很高的親和力。在 B 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)早期，產(chǎn)生足夠的 IgG 之前發(fā)揮消除病原菌的作用。

表 1：不同亞型抗體的結(jié)構(gòu)與功能    

抗體亞型鑒定
抗體亞型鑒定的原理是利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），測(cè)定待測(cè)抗體與不同亞   型特異性的抗體的結(jié)合情況，找出可以與待測(cè)抗體特異性結(jié)合的抗體，由于與待測(cè)抗體結(jié)合的抗體的特異性都是已知的，依據(jù)結(jié)合抗體的特異性可以得出待測(cè)抗體的亞型。以小鼠抗體亞型的測(cè)定為例，利用 ELISA 測(cè)定待測(cè)抗體與針對(duì)小鼠 IgG1、IgG2A、 IgG2B、 IgG3、IgM、λ、κ有特異性的抗體的結(jié)合情況。如果待測(cè)抗體抗體可以與針對(duì)小鼠 IgG1 的特異性抗體結(jié)合（通過(guò)肉眼觀察顏色深淺或通過(guò)測(cè)OD 值判斷），則該抗體的亞型為 IgG1。以此類(lèi)推，也可以測(cè)出輕鏈的亞型。

抗體亞型的鑒定

鑒定方法
目前比較常用的方法是利用試劑盒進(jìn)行抗體亞型的鑒定，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，便可以直觀的讀出抗體的亞      型。

利用試劑盒鑒定抗體亞型常見(jiàn)問(wèn)題與解決方法：
樣本中抗體濃度過(guò)高再將樣本 1:2-1:10 稀釋

常見(jiàn)問(wèn)題

可能原因

解決方案

多種重鏈結(jié)果

腹水中有雜抗體

雜交瘤細(xì)胞中含有多種細(xì)胞系

將腹水樣本至少 1:100000 稀釋
亞克隆雜交瘤細(xì)胞

結(jié)果難以判定

多種重鏈或輕鏈結(jié)果

再將樣本 1:4 或 1:8 稀釋后重新檢測(cè)

顯色較慢或顏色較弱

樣本中抗體濃度低

減少稀釋倍數(shù)；延長(zhǎng)顯色時(shí)間

表 2：常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案


抗體亞型鑒定的意義
不同亞型的抗體在結(jié)構(gòu)上有所區(qū)別，其免疫源性與在體內(nèi)發(fā)揮的作用存在差異，對(duì)抗體進(jìn)行進(jìn)一步的細(xì)分，并進(jìn)行      抗體亞型鑒定，對(duì)于疾病作用機(jī)理的研究、抗體藥物的開(kāi)發(fā)有重要意義。

相關(guān)服務(wù)
抗體亞型鑒定服務(wù):IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3，IgM，IgA 的鑒定。