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       雜交瘤技術(shù)又稱為單克隆抗體技術(shù)：將免疫動(dòng)物的 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，可以得到既能產(chǎn)生抗體又能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞，利用雜交瘤細(xì)胞可以大量的生產(chǎn)單克隆抗體。

產(chǎn)生背景
       雜交瘤技術(shù)是在體細(xì)胞融合的技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的，1975 年，Kohler 和 Milstein 成功把免疫小鼠的脾臟 B 淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，形成了 B 淋巴細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞雜合體，這種雜合體既能在體外培養(yǎng)中無(wú)限地快速增殖且存活，又能分泌單克隆抗體。隨后，他們?cè)谟?guó)《自然》雜志上發(fā)布了這一成果，并正式提出了雜交瘤的概念。

雜交瘤技術(shù)原理
       單克隆抗體由單一 B 淋巴細(xì)胞分泌得到，但 B 淋巴細(xì)胞在體外不能長(zhǎng)期存活（最多兩周），因此無(wú)法制備單一 B 淋巴細(xì)胞群，也無(wú)法進(jìn)行單抗的大量生產(chǎn)。骨髓瘤細(xì)胞不具備分泌抗體的能力，但是可以在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限繁      殖。將免疫 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，得到的雜交細(xì)胞具有雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能像 B 淋巴細(xì)胞一樣分泌抗體，又能像骨髓瘤細(xì)胞一樣無(wú)限增殖，成功克服了 B 淋巴細(xì)胞在體外存活周期短的問(wèn)題。對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，即可得到單克隆抗體。

細(xì)胞融合技術(shù)
       細(xì)胞融合技術(shù)是雜交瘤技術(shù)的基礎(chǔ)，通過(guò)聚乙二醇（PEG）（最常用）、仙臺(tái)病毒、電轉(zhuǎn)等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行人工誘      導(dǎo)，可使兩個(gè)細(xì)胞通過(guò)膜融合形成單個(gè)細(xì)胞。

融合細(xì)胞的篩選
       HAT 培養(yǎng)基篩選技術(shù)是雜交瘤技術(shù)中另一個(gè)關(guān)鍵的技術(shù)，在 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后，會(huì)產(chǎn)生多種融合結(jié) 果（未融合的骨髓瘤細(xì)胞、未融合的 B 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞、正確融合的雜交瘤細(xì)胞），為了得到所需的雜交瘤細(xì)胞，必須利用 HAT 培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選。HAT 培養(yǎng)基的篩選原理為：DNA 合成途徑有生物合成途徑與應(yīng)急合成途徑兩種，HAT 培養(yǎng)基中含有次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A） 和胸腺嘧啶核苷酸（T）等物質(zhì)，氨基喋呤可以對(duì) DNA 的生物合成途徑進(jìn)行阻斷，骨髓瘤細(xì)胞會(huì)因?yàn)樯锖铣赏緩奖蛔钄嗲易陨砣狈?yīng)急合成途徑導(dǎo)致不能增殖進(jìn)而快速的死亡；而 B 淋巴細(xì)胞因缺乏體外增殖的能力，一般在10 天左右死亡；雜交瘤細(xì)胞具有體外增殖能力且由于次黃嘌呤與胸腺嘧啶核苷酸的存在，可以通過(guò)應(yīng)急途徑合成DNA 并在 HAT 培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)，不會(huì)死亡。因此將融合后的細(xì)胞放于 HAT 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其他的融合結(jié)果會(huì)全部死亡，最終篩選出雜交瘤細(xì)胞。

雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)
       具備抗體分泌功能
       保持細(xì)胞永生性

制備流程
       利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體通常操作流程為：抗原制備、抗原免疫動(dòng)物、雜交瘤細(xì)胞制備、融合細(xì)胞的篩選、      培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞制備抗體。（詳細(xì)實(shí)驗(yàn)流程：雜交瘤單克隆抗體制備 SOP）

圖 1：雜交瘤制備單克隆抗體流程

雜交瘤技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn)
       優(yōu)點(diǎn)：與傳統(tǒng)的免疫動(dòng)物方法制備抗體相比，利用雜交瘤技術(shù)可以制備出高純度的單抗，并且可以進(jìn)行單克隆抗體      的大量生產(chǎn)。
       缺點(diǎn)：a.操作步驟繁瑣。b.利用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)出的單克隆抗體多為鼠源性，而鼠源性抗體在應(yīng)用中有諸多問(wèn)題，      例如被人類免疫系統(tǒng)所識(shí)別，產(chǎn)生人抗鼠抗體( HAMA）反應(yīng)、在人體循環(huán)系統(tǒng)中很快被清除等。

相關(guān)服務(wù)
       單克隆抗體制備服務(wù)：提供抗原制備，抗體制備，抗體標(biāo)記，抗體亞型鑒定等，保證 WB 陽(yáng)性，ELISA 效價(jià)>128,000。