97国产精品成人免费视频_国产精品高颜值极品美女在线_少妇自拍中文亚洲_黄情网站日本免费在线_一级黄色成人在线_欧美亚洲高清国产_亚洲人妻综合av一区_欧美日韩色视频一区二区看_91视频免费版下载_丰满少妇蜜桃av

     等溫滴定量熱法 (ITC) 是用于量化研究各種生物分子相互作用的一種技術(shù)。 它可直接測量生物分子結(jié)合過程中釋放或吸收的熱量。
      ITC 可以測定結(jié)合配偶體在自然狀態(tài)下的親和力，無需通過熒光標(biāo)記或固定化技術(shù)對結(jié)合配偶體進(jìn)行修飾。
      通過測量結(jié)合過程中的熱傳遞，就能夠準(zhǔn)確地確定結(jié)合常數(shù) (KD)、反應(yīng)化學(xué)量 (n)、焓 (?H) 和熵 (ΔS)。 這就提供了有關(guān)分子相互作用的完整熱力學(xué)信息。 ITC 不僅可測定結(jié)合親和力，還能闡明潛在分子相互作用的機(jī)制。
 

測量原理：
等溫滴定量熱法用來測定各生物分子之間的反應(yīng)。 該方法可測定結(jié)合親和力、化學(xué)計量以及溶液中結(jié)合反應(yīng)的熵和焓，無需使用標(biāo)記。發(fā)生結(jié)合時，熱不是被吸收就是被釋放，這是在配體被逐漸滴定到包含目標(biāo)生物分子的樣品池過程中通過靈敏量熱計而測得。
 

工作原理：

       熱核心

       微量熱計中有兩個池，其中一個含有水，作為參比池，另一個含有樣品。 微量熱計必須使這兩個池保持完全相同的溫度。 熱敏裝置檢測發(fā)生結(jié)合時兩個池之間的溫差，并反饋給加熱器，由加熱器來補(bǔ)償該溫差并使兩個池恢復(fù)到相同的溫度。
進(jìn)行測量

       參比池和樣品池被設(shè)定到所需的實(shí)驗(yàn)溫度。 將配體裝入一個非常精確的注射裝置上的注射器中。 將注射裝置插入包含目標(biāo)蛋白質(zhì)的樣品池中。 將一系列小份配體試樣注入到蛋白質(zhì)溶液中。 如果有配體與蛋白質(zhì)結(jié)合，則可檢測到并測出幾百萬分之一攝氏度的熱量變化。進(jìn)行第一次注射時，微量熱計測量被釋放的所有熱量，直到結(jié)合反應(yīng)達(dá)到平衡。  測得的熱量與結(jié)合量成正比。
結(jié)果和數(shù)據(jù)分析

      在下面的示例中，反應(yīng)是放熱的，這就意味著樣品池溫度高于參比池并由此導(dǎo)致信號出現(xiàn)下行波峰。 隨著兩個池的溫度恢復(fù)到同一水平，信號也回到其起點(diǎn)。 將第二小份配體試樣注入到樣品池中，同樣，微量熱計補(bǔ)償所檢測到小幅熱量變化。 配體與蛋白質(zhì)之間的摩爾比隨著一系列配體試樣的注入而逐漸增加。 蛋白質(zhì)越來越飽和，配體結(jié)合的次數(shù)越來越少，并且熱量變化開始減小，直到樣品池中的配體數(shù)量相對于蛋白質(zhì)而言最終表現(xiàn)出過量為止，從而使反應(yīng)朝飽和的方向進(jìn)行。
 

       然后對每個峰的面積進(jìn)行積分，并以配體與蛋白質(zhì)的摩爾比作為橫坐標(biāo)進(jìn)行繪圖。 由此得出的等溫線可擬合至導(dǎo)出親和力 (KD) 的結(jié)合模型。 結(jié)合等溫線中心的摩爾比即為反應(yīng)化學(xué)計量。 下圖給出了 1:1 結(jié)合反應(yīng)的示例圖。
 

      焓 (ΔH) 也可通過等溫線直接導(dǎo)出，它表示每摩爾結(jié)合配體所釋放的熱量。 這就意味著一次 ITC 實(shí)驗(yàn)就可提供豐富的結(jié)合反應(yīng)信息，有助于理解相互作用的性質(zhì)并探索熱力學(xué)驅(qū)動因素。

ITC 廣泛用于藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)領(lǐng)域的以下方面：

1. 量化結(jié)合親和力

2. 候選藥物的選擇與優(yōu)化

3. 測定熱力學(xué)特性和活性濃度

4. 作用機(jī)制表征

5. 在小分子藥物發(fā)現(xiàn)過程中確認(rèn)預(yù)期結(jié)合靶標(biāo)

6. 測定結(jié)合特異性和化學(xué)計量

7. 驗(yàn)證從苗頭化合物到先導(dǎo)化合物演化過程中的 IC50 值和 EC50 值

8. 酶動力學(xué)測定