BLI技術(shù)的動力學(xué)分析可用于檢測相互作用的親和力以及可逆的非共價結(jié)合的結(jié)合常數(shù)(kon)、解離常數(shù)(koff)以及親和力常數(shù)(KD)。典型的非共價結(jié)合由靜電作用、氫鍵、范德華力和疏水作用組成。分子之間的特異性相互作用對生物學(xué)的許多過程以及藥物研發(fā)至關(guān)重要。
憑借高通量、非標(biāo)記、實(shí)時定量且無液路的特點(diǎn),Octet?在大分子相互作用分析和生物藥研發(fā)領(lǐng)域具有突出優(yōu)勢。越來越多的高分文獻(xiàn)及應(yīng)用實(shí)例證明了BLI技術(shù)在小分子、化合物片段、未知樣品垂釣、競爭分析等應(yīng)用中表現(xiàn)優(yōu)異,傳感器分析模式也更容易開發(fā)靈活和創(chuàng)意的檢測方案。BLI技術(shù)在小分子互作分析的應(yīng)用案例 BLI技術(shù)用于片段化合物篩選 基于生物傳感器的片段化合物篩選是藥物研發(fā)過程中一個非常具有價值的工具。這種方法優(yōu)于許多其他的生化方法,因?yàn)槊珙^化合物可有效地通過具體的結(jié)合圖譜以及響應(yīng)值從非特異性或非理想的相互作用中區(qū)分開來,從而降低假陽性。BLI技術(shù)通過監(jiān)測生物分子結(jié)合導(dǎo)致的光的干涉圖譜的變化實(shí)現(xiàn)分子間的相互作用的實(shí)時檢測。 Charles A. Wartchow等將重組表達(dá)純化得到AVI-Tag生物素標(biāo)記的蛋白或通過體外的方式標(biāo)記生物素(biotin-LC-LC-NHS)固化至鏈酶親和素傳感器上。通過緩沖液建立基線噪音信號,以基線噪音信號的3倍標(biāo)準(zhǔn)差為閾值篩選苗頭化合物。使用了包含6500種化合物的片段文庫,以BCL-2、JNK1、eIF4E等蛋白為靶點(diǎn)進(jìn)行了篩選,比較了這些靶點(diǎn)的苗頭化合物的比率。 Francesca E. Morreale等同時使用差示掃描熒光(DSF)和BLI技術(shù)篩選E2泛素連接酶Ube2T的抑制劑。將Ube2T固化在鏈霉親和素傳感器上,對片段庫的化合物進(jìn)行篩選。利用DSF方法篩選出4種化合物,而采用BLI方法也篩選出4種化合物,其中有2種是同時用兩種方法都篩選了出來。所有六種化合物用核磁共振(NMR)進(jìn)行了驗(yàn)證并確認(rèn)這些化合物在靶點(diǎn)蛋白上的結(jié)合位點(diǎn)。