抗體藥具有性能均一、特異性好的優(yōu)勢，在腫瘤、免疫等各類疾病的治療中發(fā)揮著重要作用。國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）頒布了多個(gè)抗體藥物法規(guī)及指導(dǎo)原則，規(guī)范抗體藥物的研發(fā)生產(chǎn)及申報(bào)流程。隨著原研藥在國內(nèi)的上市和藥品采購價(jià)格的下滑，加快研發(fā)效率、降低生產(chǎn)成本成為抗體藥市場競爭的關(guān)鍵。抗體藥研發(fā)涉及篩選、活性檢測、表位作圖、一致性評(píng)價(jià)、免疫原性和質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)。Biacore 作為藥物活性檢測平臺(tái)，可以滿足藥物研發(fā)多個(gè)環(huán)節(jié)的需求，加快研發(fā)速度，其準(zhǔn)確穩(wěn)定的數(shù)據(jù)質(zhì)量已經(jīng)得到了藥企和監(jiān)管部門的廣泛應(yīng)用和認(rèn)可。目前，Biacore 基于表面等離子共振技術(shù)已經(jīng)被中國、美國和日本藥典收錄。本文將利用抗體研發(fā)與質(zhì)控中的幾個(gè)重要環(huán)節(jié)來展示Biacore分子互作技術(shù)的原理和應(yīng)用。

抗體篩選與定量

細(xì)胞株的好壞很大程度上決定了抗體藥的質(zhì)量和成本，因此細(xì)胞株的篩選與定量是抗體藥研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。ELISA 法由于檢測精度差、自動(dòng)化程度低等問題，已經(jīng)無法滿足細(xì)胞株篩選的要求。Biacore 技術(shù)可以大大提高抗體篩選的效率和準(zhǔn)確性，實(shí)現(xiàn)上清、腹水的直接檢測。動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)在抗體篩選中尤為關(guān)鍵，因?yàn)榻怆x速率決定了抗體的在靶時(shí)間，解離速率慢的抗體成藥性更好。Biacore 技術(shù)通過檢測解離速率的快慢完成排序，抓取出想要的候選分子。表達(dá)量也是細(xì)胞株開發(fā)的重要指標(biāo)，在采用Biacore技術(shù)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)篩選時(shí)，同時(shí)還可以基于捕獲量的高低對(duì)抗體濃度進(jìn)行定量，將濃度定量與篩選實(shí)驗(yàn)合二為一，大大簡化了篩選流程。例如，羅氏（Roche）就采用了Biacore 技術(shù)進(jìn)行抗體篩選，在24 h 內(nèi)完成了近400 個(gè)抗體的檢測，并篩選出了慢解離的候選抗體，進(jìn)行進(jìn)一步開發(fā)。

藥物結(jié)合活性綜合表征

在抗體體外生物活性檢測項(xiàng)目中，抗體與抗原、Fcγ 受體、FcRn 以及C1q 的親和檢測均需采用Biacore 技術(shù)進(jìn)行申報(bào)。目前美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)上市的70 多種抗體藥物中有近80% 采用了Biacore 技術(shù)完成研發(fā)和申報(bào)。例如，禮來的Taltz在2016 年獲得FDA 批準(zhǔn)用于治療銀屑病。Taltz 對(duì)IL-17A 具有較高的親和力和特異性，可以抑制IL-17A 與IL-17 受體的結(jié)合。在申報(bào)材料中，Biacore 技術(shù)用于檢測Taltz 與靶點(diǎn)IL-17A 的親和力（圖1）。

治療性抗體的功效不僅取決于Fab 片段結(jié)合抗原的活性，還取決于其Fc 片段與Fcγ 受體的相互作用，F(xiàn)cγ 受體的親和力能夠作為藥物功效及半衰期的預(yù)測指標(biāo)。2013 年，Roche 針對(duì)CD20 靶點(diǎn)的單抗Gazyva 獲批上市，用于慢性淋巴性白血病的治療。在申報(bào)材料中，Biacore 技術(shù)用于Fcγ 受體結(jié)合活性的測定，結(jié)果顯示Gazyva 比美羅華有更好的FcγRIII 結(jié)合能力（圖2）。

抗體與FcRn 的親和強(qiáng)弱程度可以預(yù)測抗體的半衰期。Celltrion 公司的Inflectra 是Remicade 的生物仿制藥。在申報(bào)材料中，Biacore 技術(shù)用于證明Inflectra 和Remicade 與FcRn 結(jié)合的一致性（圖3）。

C1q 是補(bǔ)體激活途徑中的啟動(dòng)蛋白，C1q 的常規(guī)檢測方法為ELISA，但由于抗體和C1q 的結(jié)合較弱，采用ELISA 法檢測可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此很多企業(yè)選擇采用Biacore 技術(shù)檢測抗體和C1q 的結(jié)合。

Biacore 分子互作技術(shù)除了在以上抗體篩選、生物活性、一致性評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制中的應(yīng)用外，在表位分析、抗體改造、免疫原性等環(huán)節(jié)也發(fā)揮著巨大作用。其準(zhǔn)確穩(wěn)定的數(shù)據(jù)質(zhì)量已經(jīng)得到了藥企和監(jiān)管機(jī)構(gòu)的廣泛應(yīng)用和認(rèn)可，能夠?yàn)榧涌炜贵w藥物上市保駕護(hù)航。

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